Efecto de tres crioprotectores en bacterias acido lácticas obtenidas del suelo de Rio Negro, Baños.

El presente trabajo experimental se realizó con el objetivo de evaluar el efecto de tres crio protectores (glicerol, dimetil Sulfoxido y etilenglicol) en bacterias acido lácticas obtenidas del bosque primario de Rio Negro, en lo que tiene que ver en la viabilidad en los días: 0, 7, 15 y 30 días y su dinámica de crecimiento. Se utilizó 1.5 ml de muestras del suelo por cada repetición, la cual contara de 5 repeticiones siendo en total de 22.5 ml. Se aplicó un diseño experimental DCA con un solo factor, los resultados experimentales obtenidos fueron sometidos a análisis de varianza, separación de medias (Prueba de Tukey con un valor P ≤ 0.05) y estadística descriptiva. De acuerdo a nuestros resultados las características macroscópicas de las colonias BAL presentan una forma redonda puntiforme, un color blanco cremoso y un aspecto entero y un tamaño de 1,2 mm. Con respecto a la viabilidad de las BAL el mejor fue el crioprotector glicerol ya que presento a los 0 días 0,00 UFC/mL; a los 7 días 71.20 UFC/mL, a los 15 días de 154.40 UFC/mL y finalmente a los 30 días de 174.20 UFC/mL. En lo referente a la dinámica de crecimiento de las bacterias acido lácticas al emplear el glicerol obtuvo un mejor crecimiento de las BAL en las que presento a las 24 horas 9.8 UFC/mL, a las 72 horas 19,0 UFC/mL y a las 96 horas de 35,4 UFC/ml. Por lo que se recomienda emplear el glicerol como crioprotector para el desarrollo y crecimiento de bacterias ácido lácticas.This experimental work was carried out with the objective of evaluating the effect of three cryoprotectants (glycerol, dimethyl sulfoxide and ethylene glycol) on lactic acid bacteria obtained from the primary forest of Rio Negro, with regard to viability at days 0, 7, 15 and 30 days and their growth dynamics. A total of 1.5 ml of soil samples were used for each repetition, which consisted of 5 repetitions, with a total of 22.5 ml. A DCA experimental design with a single factor was applied. The experimental results obtained were subjected to analysis of variance, separation of means (Tukey's test with a P value ≤ 0.05) and descriptive statistics. According to our results the macroscopic characteristics of BAL colonies present a round punctiform shape, a creamy white color and an entire appearance and a size of 1.2 mm. Regarding the viability of the LAB, the best was the cryoprotectant glycerol since it presented at 0 days 0.00 CFU/mL; at 7 days 71.20 CFU/mL, at 15 days 154.40 CFU/mL and finally at 30 days 174.20 CFU/mL. With regard to the growth dynamics of lactic acid bacteria, the use of glycerol resulted in a better growth of LAB, with 9.8 CFU/mL at 24 hours, 19.0 CFU/mL at 72 hours and 35.4 CFU/mL at 96 hours. Therefore, it is recommended to use glycerol as a cryoprotectant for the development and growth of lactic acid bacteria

Evaluación de etilenglicol como crioprotector en la crioconservación de semen de bagre blanco (Sorubim cuspicaudus, Pimelodidae)

Se evaluó el semen crioconservado de Sorubim cuspicaudus utilizando etilenglicol (ETG) a tres niveles de inclusión (5, 10, 15 %). Machos (n = 13) en fase de espermiación y hembras (n = 6) en maduración final se indujeron con 0,4 ml de Ovaprim®/Kg, después de 12 a 14 horas post-inducción se colectó el semen en viales Eppendorf de 2 ml de capacidad. Las diferentes soluciones crioprotectoras se prepararon con glucosa 6 % (p/v), leche en polvo descremada 5 % (pv) y agua destilada. El semen fue diluido en proporción 1:3 (semen:diluyente), empacado en macrotubos de 2,5 ml y congelado en vapores de nitrógeno líquido (NL) durante 30 minutos y luego almacenados en termos criogénicos sumergidos directamente en NL (-196 °C). El semen crioconservado fue descongelado en baño serológico a 35 °C durante 90 segundos. La movilidad total, progresividad y velocidad espermática del semen fresco y descongelado se analizó con el software Sperm Class Analizer SCA® (Microptic SL, España). La fertilidad y eclosión se evaluó con 1,0-1,5 g de ovocitos en incubadoras experimentales de flujo ascendente de dos litros de capacidad. Se utilizó un diseño completamente aleatorizado. El semen fresco registró tasa de eclosión de 51,8±21 %, sin observarse diferencia significativa con la obtenida con el semen crioconservado con ETG 5 % (38,6 ± 13,9 %) (p 0,05); mientras que ETG 15 % (9,6 ± 2,9 %) reportó la menor eclosión (p 0,05). Los resultados sugieren que la solución crioprotectora compuesta por ETG 5 %, glucosa 6 % y leche en polvo 5 % es una alternativa viable para la crioconservación de semen de Sorubim cuspicaudus con fecundaciones similares al usar semen fresco.The catfish Sorubim cuspicaudus cryopreservation semen was evaluated using three levels (5, 10, 15 %) of ethylene glycol (ETG). Males (n = 13) undergoing spermiation and in final maturation females (n = 6) were induced with 0.4 ml Ovaprim®/Kg, after 12 and 14 post-induction the semen was collected in 2 ml Eppendorf vials. The different cryoprotectants solutions were prepared with glucose 6 % (w/v) skimmed milk powder 5 % (w/v) and distilled water. The semen was diluted in ratio 1:3 (semen:extender), packed in macrotubes of 2.5 ml and frozen in liquid nitrogen (NL) vapor for 30 minutes, then the macrotubes were stored in cryogenic tanks submerged directly in NL (-196 °C). The sperm were thawed in serological bath to 35 °C for 90 seconds. The total motility, total progressivity and velocities in fresh and thawed semen were analyzed with the Sperm Class Analyzer software SCA® (Microptic SL, Spain). Fertility and hatching rates were assessed with 1.0-1.5 g of oocytes in experimental up flow incubators two liters, a completely randomized design was used. The hatching rate of fresh semen was 51,8±21 %, with no significant differences with semen cryopreserved with ETG 5 % (38.6 ± 13.9 %) (p 0,05), while ETG 15 % (9.6 ± 2.9 %), recorded the lower hatching rate (p 0.05). The results suggest that the cryoprotectant solution composed of ETG 5 %, glucose 6 % and powdered milk 5 % is a viable alternative for semen cryopreservation of the catfish Sorubim cuspicaudu

Soya-lecithin in Extender Improves the Freezability and Fertility of Buffalo (Bubalus bubalis) Bull Spermatozoa

Bocachico Prochilodus magdalenae es una especie endémica de Colombia y sus volúmenes de captura la ubican como la más importante de las pesquerías continental colombiana; no obstante, en los últimos cuarenta años sus capturas han disminuidos aproximadamente el 70%, por tanto ha sido categorizada como vulnerable a la extinción. Entre las causas de este declive se señalan la degradación ambiental, pérdida de planos inundables y la fuerte presión pesquera. La criopreservación se destaca como una estrategia importante de conservación ex situ in vitro en especies con riesgo de extinción o vulnerables. Por tanto el objetivo del estudio fue evaluar el etilenglicol (EG) y la leche en polvo descremada (LP) en la criopreservación de semen de bocachico. La solución crioprotectora estuvo compuesta por EG (6%, 8% o 10%), LP (3%, 5% o 7%) y como diluyente se utilizó una solución de glucosa al 6%. El semen fue diluido en proporción 1:3 (semen:diluyente) a temperatura de 28±1ºC y envasado en pajillas de 0.5 mL. Se utilizó un diseño factorial (3x3) completamente al azar, para un total de nueve tratamientos y se analizó el semen fresco como control para comparar la calidad del semen descongelado. En el semen fresco se evalúo volumen, color, tiempo de activación, movilidad total y concentración espermática; mientras que en el semen descongelado se evaluó movilidad total, tipos de movilidad y velocidad espermática. El porcentaje de inclusión de EG en el rango evaluado (6-10%), no afectó significativamente (p>0.05) ninguna de las variables de calidad seminal analizadas con excepción de la tasa de eclosión (p<0.05). Mientras que la LP presento efectos significativos (p<0.05) sobre el porcentaje de espermatozoides estáticos y altamente significativo (p<0.01) sobre el desempeño reproductivo (tasa de fertilización y eclosión). El mayor valor de movilidad total se obtuvo cuando se criopreservó con EG10xLP7 (38.4±18.4%) sin observarse diferencia significativa (p<0.05) con los tratamiento que utilizaron EG al 6 y 8% a cualquier porcentaje de inclusión de la LP (3-7%) que oscilaron entre 27.8±4.8% (EG8xLP3) y 34.3±18.1% (EG8xLP7). La mayor fertilidad fue de 64.2±15.1% se encontró en el semen criopreservado EG6xLP3, lo que equivale al tratamiento con menor inclusión de crioprotectores. Los resultados del estudio permitieron concluir que concentraciones mayores a 6% de EG con porcentajes de inclusión de LP mayores a 5% pueden tener efecto negativo sobre el espermatozoide de Prochilodus magdalenae, causándole una disminución de su calidad y afectando su capacidad fertilizanteRESUMEN…… 101. INTRODUCCIÓN…… 112. MARCO TEORICO…… 132.1 GENERALIDADES DEL BOCACHICO Prochilodus magdalenae…….. 132.1.1 Bio-ecología…… 132.2 CRIOCONSERVACIÓN DE SEMEN…… 142.2.1 Generalidades en peces…… 142.2.3 Crioconservación de semen en peces de Colombia…… 162.3 CRIOPROTECTORES…… 192.3.1 Crioprotectores permeables…… 202.3.2 Crioprotectores no permeables…… 212.3.3 Leche en polvo (LP) y etilenglicol (EG) como crioprotectores…… 232.4 CALIDAD SEMINAL…… 252.4.1 Movilidad espermática…… 252.4.2 Tiempo de motilidad o actividad espermática….. 252.4.3 Velocidades espermáticas…… 252.5 DESEMPEÑO REPRODUCTIVO…… 263. OBJETIVOS…… 273.1 OBJETIVO GENERAL…… 273.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS…… 274. MATERIALES Y MÉTODOS…… 284.1 LOCALIZACIÓN DEL ESTUDIO…… 284.2 MATERIAL BIOLOGICO…… 284.2.1.Seleccion de reproductores…… 284.2.2.Induccion al desove…… 294.3 OBTENCIÓN DEL SEMEN….. 294.4 TRATAMIENTOS Y CRIOCONSERVACIÓN DEL SEMEN…… 294.4.1.Congelacion y descongelación del semen…… 304.5 CALIDAD SEMINAL…… 314.5.1. Volumen y color…… 314.5.2. Movilidad total, velocidad y progresividad espermática…… 314.5.3. Tiempo de activación…… 324.5.4. Concentración espermática…… 324.6 DESEMPEÑO REPRODUCTIVO…… 324.6.1.Fertilidad…… 334.6.2. Eclosión…… 334.7 CALIDAD DE AGUA…… 344.8 CONSIDERACIONES ETICAS…… 344.9 ANALISIS ESTADISTICOS…… 345. RESULTADOS Y DISCUSION…… 355.1 EVALUACIÓN DE SEMEN FRESCO…… 355.2 EVALUACIÓN DE SEMEN CRIOCONSERVADO…… 365.2.1 Efecto de factores y su interacción …… 365.3 CALIDAD DEL SEMEN CRIOCONSERVADO (DESCONGELADO)…… 375.3.1 Movilidad total…… 395.3.2 Progresividad total…… 405.3.3 Tipos de movilidades…… 415.3.4 Velocidades espermáticas…… 425.4 DESEMPEÑO REPRODUCTIVO DE SEMEN CRIOCONSERVADO…… 445.4.1 Fertilidad…… 445.4.2 Eclosión…… 466. CONCLUSION…… 497. BIBLIOGRAFIA…… 50MaestríaMagíster en Ciencias Ambientale